lncRNA是一類長鏈(>200nt)非編碼RNA,作用范圍廣泛且機制復雜。lncRNA不但可以與DNA、RNA結合行使功能,還可以與蛋白結合參與染色質表觀修飾。目前,RIP、CLIP、fRIP等可用于染色質與RNA互作的研究,但是這些方法無法揭示哪些染色質與特定lncRNA相關,這也就限制lncRNA調控功能的研究。
最近發表于《Genome Biology》的PIRCh-seq恰好解決了這一問題。該方法能夠對組蛋白特定修飾下的染色質相關RNA進行分析。研究人員采用該方法已鑒定出數百種與染色質相關的RNA,分析后發現lncRNA在這些RNA中占多數,并根據其與特定組蛋白修飾的關聯模式進行了分組。
PIRCh-seq具體方法如下圖所示:
首先,采用glutaraldehyde處理活細胞進行化學交聯,然后用甘氨酸淬滅(這一步是為防止染色質相關RNA的降解)。
隨后,提取染色質,超聲破碎獲得300-2000bp的片斷,使用組蛋白修飾特異性抗體進行免疫沉淀。
最后,除去殘留的DNA、蛋白質,對RNA進行深度測序。
研究者采用該方法對人、小鼠染色質相關RNA進行了研究,結果表明,非編碼RNA尤其是lncRNA在染色質上富集。
對富集的lncRNA按功能進行分類,可分為以下六類,但具體功能仍未明確:
希望這一技術能夠為染色質-RNA互作機制的研究注入新的力量。